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蔗糖转化酶测定

蔗糖

作为植物体内主要的光合产物和运输物质，其代谢强弱对许多生理活动都会产生显著影响

.而转化酶则是催化蔗糖降解的重要酶类，测定转化酶活性对了解光合产物的贮存、转运及累积都有重要意义。

原理：

转化酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖+H2O—葡萄糖+果糖。

根据催化反应所需的最适PH,可将转化酶进一步分为两种，一种称为酸性转化酶，其催化反应的最适pH为4.05.5,主要分布在液泡和细胞壁中，另一类转化酶称为碱性或中性转化酶.其最适pH为7.08.0，主要分布在细胞质中。

蔗糖是非还原糖，水解后的产物葡萄糖和果糖都是还原糖，因此可测定水解生成的还原糖的量来表示酶活性的大小。还原糖在碱性条件下与3,5-二硝基水杨酸试剂共热时，可将黄色的3,5-二硝基水杨酸还原为棕红色的氨基化合物。在一定范围内还原糖的量与反应液颜色深浅成正比。

试剂

(1).提取缓冲液

(2).透析缓冲液

(3).酶反应液：80mmolL-1

乙酸

-K3PO4

（

pH4.7和pH7.0）缓冲液，内含50mmolL-1

蔗糖。

(4).葡萄糖标准液：1mgmL-1

(5).3，5-二硝基水杨酸试剂

方法步骤：

(1).酶液制备
(2).酶反应：取3支5mL具塞试管，加入0.95mL反应液和50μL透析后的酶液，30℃水浴中反应10min，煮沸3min中止反应。用煮死酶液作对照。
(3).还原糖含量测定：往各反应试管中再加3，5-二硝基水杨酸试剂1mL，沸水浴5min，冷却至室温，于540nm比色测定生成的还原糖的量。
(4).标准曲线制作：取7支5mL具塞试管，并按下表加入各种试剂，按上述步骤3进行，测定其吸光度值。以吸光度值为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线，以计算反应生成的葡萄糖量。

(5).结果计算：酶活力以mg葡萄糖g-1FWh-1

表示。

式中，

C：从标准曲线查得的葡萄糖量（mg）；FW：组织鲜重（g）；t：反应时间（h）；Vt：提取酶液总体积（mL）；Vs：测定时取用酶液体积（mL）；n：提取液测定中的稀释倍数。